增強(qiáng)型人體血腦屏障芯片可在體內(nèi)進(jìn)行藥物和抗體轉(zhuǎn)運(yùn)

就像機(jī)場(chǎng)安全屏障要么清除授權(quán)旅行者或阻止未經(jīng)授權(quán)的旅行者和他們的行李進(jìn)入中央操作區(qū)域，血腦屏障(BBB)嚴(yán)格控制必需營(yíng)養(yǎng)素和能量代謝物進(jìn)入大腦并阻止不需要的物質(zhì)循環(huán)在血液中。重要的是，它是高度有組織的薄血管和支持細(xì)胞結(jié)構(gòu)，也是阻止拯救生命的藥物到達(dá)大腦以有效治療癌癥，神經(jīng)變性和其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的主要障礙。在許多腦部疾病中，BBB也會(huì)局部分解，導(dǎo)致神經(jīng)毒性物質(zhì)，血細(xì)胞和病原體泄漏到大腦中并造成無(wú)法挽回的破壞。

為了研究BBB和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)，研究人員主要依靠動(dòng)物模型，如小鼠。然而，BBB在這些模型中的精確構(gòu)成和運(yùn)輸功能可能與人類(lèi)患者中的顯著不同，這使得它們對(duì)于藥物遞送和治療功效的預(yù)測(cè)是不可靠的。迄今為止，嘗試使用原代腦組織衍生細(xì)胞重建人BBB的體外模型還不能足夠模擬BBB的物理屏障，運(yùn)輸功能以及藥物和抗體穿梭活動(dòng)，以用作治療開(kāi)發(fā)工具。

現(xiàn)在，由Donald Ingber，醫(yī)學(xué)博士，博士領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)。在哈佛大學(xué)的Wyss生物啟發(fā)工程研究所通過(guò)利用其微流體器官芯片(器官芯片)技術(shù)結(jié)合發(fā)育啟發(fā)的缺氧模擬方法將人多能干(iPS)細(xì)胞分化為腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，克服了這些局限性細(xì)胞(BMVECs)。由此產(chǎn)生的“缺氧增強(qiáng)的BBB芯片”概括了人類(lèi)BBB的細(xì)胞組織，緊密屏障功能和運(yùn)輸能力; 并且它允許以比現(xiàn)有體外系統(tǒng)更接近地模擬體內(nèi)BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的方式運(yùn)輸藥物和治療性抗體。他們的研究在Nature Communications報(bào)道。

Wyss Institute創(chuàng)始總監(jiān)Ingber表示：“我們?cè)隗w外以足夠高的前所未有的保真度對(duì)人體BBB中的藥物和抗體穿梭進(jìn)行建模的方法在現(xiàn)有能力方面取得了重大進(jìn)展。” “它解決了整個(gè)制藥和生物技術(shù)領(lǐng)域藥物開(kāi)發(fā)計(jì)劃的迫切需求，我們現(xiàn)在的目標(biāo)是利用我們獨(dú)特的人才和資源，在Wyss研究所幫助克服專門(mén)的'血腦障礙運(yùn)輸計(jì)劃'。” Ingber還是HMS的Judah Folkman血管生物學(xué)教授和波士頓兒童醫(yī)院的血管生物學(xué)項(xiàng)目，以及SEAS的生物工程教授。

BBB由BMVEC形成的薄毛細(xì)血管，稱為周細(xì)胞的多功能細(xì)胞包裹在血管外部，以及星形星形膠質(zhì)細(xì)胞，這些非神經(jīng)元腦細(xì)胞也通過(guò)腳狀過(guò)程接觸血管。在周細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的存在下，內(nèi)皮細(xì)胞可以產(chǎn)生典型的人BBB的緊密密封的血管壁屏障。

Ingber的團(tuán)隊(duì)首先使用一種方法將人類(lèi)iPS細(xì)胞分化為培養(yǎng)皿中的腦內(nèi)皮細(xì)胞，該方法之前由威斯康星大學(xué)麥迪遜分校的化學(xué)和生物工程教授Eric Shusta博士開(kāi)發(fā)。生物吸入的附加力量。“因?yàn)樵谂咛ブ?，BBB在低氧條件下(缺氧)形成，我們?cè)趦H僅5%而不是正常20%氧氣濃度的大氣中長(zhǎng)時(shí)間分化iPS細(xì)胞，”共同第一作者Tae-說(shuō)。 Eun Park，Ph.D。“因此，iPS細(xì)胞啟動(dòng)了一個(gè)與胚胎非常相似的發(fā)育計(jì)劃，產(chǎn)生的BMVEC表現(xiàn)出比正常氧氣條件下產(chǎn)生的BMVEC更高的功能。” Park是Ingber的博士后研究員

研究人員在先前的人類(lèi)BBB模型的基礎(chǔ)上，將缺氧誘導(dǎo)的人類(lèi)BMVEC轉(zhuǎn)移到微流體器官芯片裝置的兩個(gè)平行通道之一中，該裝置被多孔膜分開(kāi)并連續(xù)灌注培養(yǎng)基。另一個(gè)通道填充了原始人腦周細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的混合物。在額外一天的缺氧處理后，人BBB芯片可以在正常氧濃度下穩(wěn)定維持至少14天，這遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)過(guò)去嘗試的過(guò)去體外人BBB模型。

在灌注BBB芯片的流體的剪切應(yīng)力下，BMVEC繼續(xù)形成血管，并在多孔膜的另一側(cè)與周細(xì)胞對(duì)齊形成密集界面，以及星形膠質(zhì)細(xì)胞向它們延伸過(guò)程通過(guò)膜上的小開(kāi)口。“與我們?cè)跊](méi)有缺氧或流體切應(yīng)力的情況下產(chǎn)生的對(duì)照BBB相比，或者與成人大腦來(lái)源的內(nèi)皮代替的相比，工程化BBB的獨(dú)特形態(tài)與形成更緊密的屏障(包含更多數(shù)量的選擇性轉(zhuǎn)運(yùn)和藥物穿梭系統(tǒng))相對(duì)應(yīng)。 iPS細(xì)胞，“Nur Mustafaoglu博士，該研究的共同第一作者和Ingber團(tuán)隊(duì)的博士后研究員。“此外，我們可以模仿臨床患者的治療策略效果。

為了提供額外的證據(jù)，證明缺氧增強(qiáng)的人類(lèi)BBB芯片可以用作研究向大腦輸送藥物的有效工具，該團(tuán)隊(duì)研究了一系列運(yùn)輸機(jī)制，這些機(jī)制可以阻止藥物通過(guò)泵送回到大腦中的目標(biāo)進(jìn)入血流(流出)，或相反，允許營(yíng)養(yǎng)物和藥物選擇性地運(yùn)輸穿過(guò)BBB(轉(zhuǎn)胞吞作用)。

“當(dāng)我們特異性地阻斷P-gp(一種關(guān)鍵的內(nèi)皮外排泵)的功能時(shí)，我們可以大大增加抗癌藥物多柔比星從血管通道到腦通道的轉(zhuǎn)運(yùn)，這與人類(lèi)患者觀察到的非常相似。，“帕克說(shuō)。“因此，我們的體外系統(tǒng)可用于確定減少外排的新方法，從而促進(jìn)藥物在未來(lái)進(jìn)入大腦。”

在另一個(gè)場(chǎng)所，藥物開(kāi)發(fā)商正在嘗試?yán)?ldquo;受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用”作為穿越藥物負(fù)載的納米粒子，更大的化學(xué)和蛋白質(zhì)藥物以及整個(gè)BBB的治療性抗體的載體。“缺氧增強(qiáng)的人類(lèi)BBB芯片概括了關(guān)鍵轉(zhuǎn)胞吞途徑的功能，例如LRP-1和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體使用的那些，它們負(fù)責(zé)從循環(huán)血液中攝取重要的脂蛋白和鐵，并將它們釋放到大腦的另一側(cè)。 BBB。通過(guò)利用不同的臨床前策略利用這些受體，我們可以忠實(shí)地模仿先前在體內(nèi)靶向轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的治療性抗體的穿梭，同時(shí)保持體外BBB的完整性，“Mustafaoglu說(shuō)。

基于這些發(fā)現(xiàn)，Wyss研究所啟動(dòng)了“血腦障礙運(yùn)輸計(jì)劃”。“最初，BBB運(yùn)輸計(jì)劃旨在利用新型轉(zhuǎn)錄組學(xué)，蛋白質(zhì)組學(xué)和iPS細(xì)胞方法發(fā)現(xiàn)富含BMVEC血管表面的新穿梭靶標(biāo)。同時(shí)，我們正在開(kāi)發(fā)針對(duì)已知穿梭靶標(biāo)的全人類(lèi)抗體穿梭機(jī)大腦定位能力，“與Ingber合作的BBB運(yùn)輸計(jì)劃的工作負(fù)責(zé)人James Gorman博士說(shuō)。“我們的目標(biāo)是與競(jìng)爭(zhēng)前關(guān)系中的多個(gè)生物制藥合作伙伴合作，開(kāi)發(fā)出具有卓越功效和工程靈活性的梭子，用于摻入抗體和蛋白質(zhì)藥物，因?yàn)檫@是患者和整個(gè)領(lǐng)域急需的”。

作者認(rèn)為，除藥物開(kāi)發(fā)研究外，缺氧增強(qiáng)型人BBB芯片還可用于模擬影響B(tài)BB 的腦疾病方面，如阿爾茨海默氏癥和帕金森病，以及通過(guò)使用患者衍生的高級(jí)個(gè)性化醫(yī)療方法iPS細(xì)胞。